流式细胞仪的样本进样设计核心在于正压与负压两种模式。负压上样利用真空吸力将样本吸入，结构简单但流速易受液位和粘度影响，适合常规定性分析。正压上样则通过气压将样本推入流动室，流速恒定精准，不仅支持绝对计数，还能温和处理脆弱细胞及微量珍贵样本。两者各有优劣，正压模式凭借高稳定性与低损伤特性，已成为高端定量检测的首选。

负压上样

这是传统流式细胞仪（如早期的BD FACSCalibur, Beckman Coulter EPICS等）最常用的方式。

工作原理：
仪器内部的真空泵在流动室（Flow Cell）的出口端产生负压（吸力）。当采样针插入样本管时，大气压将样本“压”入采样针，随后被真空吸力吸入流动室。样本流速主要由真空度和采样针在液面下的深度决定。

优点：

结构相对简单：早期仪器设计成熟。

自动清洗方便：利用强大的吸力可以快速抽走管路中的残留样本和清洗液。

缺点：

流速不稳定：随着样本体积减少，采样针浸入深度变化，或者样本粘稠度不同，会导致吸入流速波动，影响数据采集的准确性（特别是绝对计数）。

易产生气泡：强烈的吸力容易在管路中引入微小气泡，干扰信号。

对样本有剪切力：高速吸入可能对脆弱细胞（如某些原代细胞、干细胞）造成机械损伤。

交叉污染风险：如果清洗不彻底，高浓度样本可能残留在管路中被吸入下一个样本。

无法处理微量样本：通常需要较大的死体积（Dead Volume），难以吸取管底最后几微升的珍贵样本。

正压上样

现代高端流式细胞仪（如BD FACSymphony, Beckman Coulter CytoFLEX, Thermo Fisher Attune等）多采用此模式，尤其是具备绝对计数功能的仪器。

工作原理：
仪器通过向样本管上方施加精确控制的气压（正压），将样本从采样针“推”入流动室。通常配合高精度的注射泵或压力传感器来控制流速。

优点：

流速极其稳定：无论样本体积多少、粘稠度如何，只要压力恒定，流速就恒定。这对绝对细胞计数至关重要。

保护细胞： Gentle的推力减少了剪切力，更适合脆弱细胞。

微量样本检测：可以设置“排空”模式，几乎能吸取管内所有液体（低至几微升），无浪费。

减少气泡：正向推动不易产生气泡。

降低交叉污染：结合严格的清洗程序，正压推送能更有效地控制液流路径。

缺点：

系统复杂：需要精密的压力控制系统和密封良好的样本管架。

成本较高：通常出现在较新型或高端机型上。

操作建议

使用负压仪器时，核心在于维持流体稳定。务必保证样本管内有充足液体，防止液面过低吸入空气中断检测；针对全血、骨髓等粘稠样本，应适当稀释或切换至低流速模式，以减少剪切力损伤；进行绝对计数时，因流速易波动，必须加入计数微球作为内参校正数据；此外，上样前需彻底去除气泡，避免信号干扰。

使用正压仪器时，重点在于系统密封与浓度控制。需确保样本管盖密封严实，防止漏气导致推力不足；虽可充分利用微量上样功能处理珍贵样本，但切忌强行吸干，以免管底沉淀杂质堵塞喷嘴；尽管正压模式下流速恒定，仍需严格控制细胞浓度，避免因浓度过高引发重合事件，确保单细胞检测的准确性。

总结

正压上样代表了流式技术的进步，提供了更高的数据精度、更好的细胞保护和更强的微量样本处理能力，是目前科研和临床高端应用的首选；而负压上样在常规定性分析中依然可靠，但在定量和珍贵样本处理上存在局限。菲恩生物提供专业流式配色方案与高品质抗体，优化多色检测，提升灵敏度与准确性，助力免疫、肿瘤及自身免疫病研究，诚邀合作共促创新！