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Annexin V-EGFP细胞凋亡检测试剂盒

  • Assay试剂盒
  • 发布时间:2020-10-15 11:46   咨询量:
  • 英文名称:Annexin V-EGFP Apoptosis Kit
  • 产品货号:K018
  • 简介:菲恩生物Annexin V-EGFP细胞凋亡检测试剂盒是一种明亮且光稳定的绿色荧光蛋白,可以区分凋亡与坏死,快速方便,稳定性更高,可以使用流式细胞仪、荧光显微镜或其它荧光检测设备进行检测。
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    产品详情
    名称:Annexin V-EGFP Apoptosis Kit
    介绍:Annexin V选择性结合磷酯酰丝氨酸(phosphatidylserine,简称 PS)。磷酯酰丝氨酸主要分 布在细胞膜内侧,即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期,不同类型的细胞都会把 磷酯酰丝氨酸外翻到细胞表面,即细胞膜外侧。磷酯酰丝氨酸暴露到细胞表面后会促进凝血 和炎症反应。而 Annexin V 和外翻到细胞表面的磷酯酰丝氨酸结合后可以阻断磷酯酰丝氨酸的促凝血和促炎症反应活性。可以使用流式细胞仪、荧光显微镜或其它荧光检测设备进行检测。染色过程仅需10分钟。另外,该测定可以直接在活细胞上进行。EGFP比其他荧光试剂更亮,光稳定性更高。当同时进行膜联蛋白V-EGFP和PI染色时,该试剂盒可以区分凋亡与坏死。
    货号:K018
    存储:4°摄氏度
    试剂盒主要组成:√ 检测方法-流式细胞仪(Ex = 488 nm; Em = 530 nm)和荧光显微镜
    √ 样品类型-活细胞(悬浮细胞和粘附细胞)
    √ 种属-哺乳动物
    √ 试剂盒规格-25、100、400次试验
    √ 应用-检测细胞凋亡的早期/中期;区分凋亡和坏死。
    特点与优势:√ 简单的一步染色过程,只需10分钟
    √ 快速方便
    √ EGFP是一种明亮且光稳定的绿色荧光蛋白,当同时进行膜联蛋白V-EGFP和PI染色时,该试剂盒可以区分凋亡与坏死
    试剂盒组件:√ 膜联蛋白V-EGFP
    √ 1X结合缓冲液
    √ 碘化丙锭(PI)
    操作方案:A.用膜联蛋白V-EGFP孵育细胞
    1.通过所需方法诱导细胞凋亡。
    2.离心收集1-5 x 105个细胞。
    3.将细胞重悬于500 µl 1X Binding Buffer中。
    4.加入5 µl Annexin V-EGFP和5 µl碘化丙啶(PI 50µg / ml,可选)。
    5.在黑暗中于室温下孵育5分钟。
    根据分析方法,继续下面的B或C。
    B.流式细胞仪定量
    使用FITC信号检测器(通常为FL1)和藻红蛋白发射信号检测器(通常为FL2)进行PI染色,通过流式细胞术(Ex = 488 nm; Em = 530 nm)分析膜联蛋白V-EGFP的结合。在与膜联蛋白V-EGFP(步骤A.3-5)孵育之前,先用含血清的培养基一次。
    C.通过荧光显微镜检测
    将步骤A.5中的细胞悬液放在载玻片上。用玻璃盖玻片盖住细胞。为了分析贴壁细胞,可直接在盖玻片上培养细胞。孵育后(步骤A.5),将载玻片倒在载玻片上并观察细胞。还可以在可视化之前将细胞清洗并固定在2%甲醛中
    1.固定前必须将细胞与膜联蛋白V-EGFP一起孵育,因为任何细胞膜破裂都可能导致膜联蛋白V与细胞膜内表面PS的非特异性结合
    2.使用用于FITC和罗丹明的双重滤光片组在荧光显微镜下观察细胞。
    结合膜联蛋白V-EGFP的细胞在质膜上会显示绿色染色。失去膜完整性的细胞将在整个细胞核上显示红色染色(PI),并在细胞表面(质膜)上显示绿色染色的晕圈(EGFP)。
    

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