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抗体质量指标有哪些?

来源:菲恩生物   发布时间:2019-06-03 11:42   点击量:

抗体核心的基本属性,包括抗体分子的结合特异性(在整个分子和表位水平上识别同一靶标)、交叉反应性(非靶标反应物和脱靶程度)、稳定性等。

抗体
 
1.特异性又包括蛋白特异性、实验方法特异性和种属特异性。目前普遍采用免疫原对宿主动物进行刺激诱导免疫反应的方法生产抗体,免疫原可以是全长蛋白、蛋白质片段、多肽、整个生物体(例如细菌)或细胞等,这就需要确认免疫原与您要检测的蛋白区域一致或包含在其内。例如,如果打算通过FACS检测活细胞上的细胞表面蛋白,请选择由蛋白的胞外区制备的抗体。
不同的实验方法对抗体结合抗原表位的要求不一样,许多抗体仅能识别已还原和变性的蛋白质,因为这样露出了蛋白质折叠形成的二级和三级结构中隐藏起来的表位。另一方面,有些抗体仅能识别天然、折叠状态的蛋白质上的表位。
Elisa、IHC等实验方法通常要求抗体能识别空间表位或结构表位,而WB实验则主要识别线性表位,能做WB实验的抗体不一定能应用于elisa或IHC实验中,反之能用于Elisa、IHC的抗体不一定能应用于WB。
目前大部分商品化抗体都是以人源蛋白序列为模板进行重组蛋白或多肽抗原设计的,但抗体通常可与来自其它生物体的具有氨基酸序列高度同源性的相同靶蛋白反应,我们可根据自己需要选择具有合适种属特异性的抗体。
2.通常我们认为单克隆抗体的特异性优于多克隆抗体,而多抗的亲和力优于单抗,但如果抗原设计水平较高,多抗也能达到单抗的特异性水平。目前市面上主要以多抗为主,种属来源主要是兔和山羊,而单抗主要有鼠单抗和兔单抗。
3.抗体作为免疫系统中最重要的分子之一,是一类相对稳定的蛋白,其稳定性是自然进化筛选的结果。大部分抗体4度短暂放置两周仍具有一定的活性,作为商业化产品,我们往往加入50%无菌甘油,分装成小支冻存于-20度(禁止冻存于-80度,此温度低于甘油的冷凝点,溶液冻结会损害抗体活性),避免反复冻融,这样可保证2年内抗体都是有效的。最理想的抗体保存方式是在添加冻干保护剂的情况下对抗体进行冷冻干燥处理,这样的抗体可有效保存5-8年。


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