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ELISA试剂盒中的基质效应

来源:菲恩生物   发布时间:2019-10-26 14:37   点击量:

2001年6月,美国曾爆出过一个大新闻:因为临床诊断中,hCG 免疫检测试剂盒得到了假阳性结果,使一位名叫Jennifer Rufer的女性被误诊为癌症,因此经历了长期化疗、肺部手术、甚至子宫切除。当事人把医院和诊断试剂公司告上法庭,获得了1620万美元的赔偿,创下当时医疗事故的最高赔偿金额。
痛苦的遭遇,巨额的赔偿,就因一个hCG检测假阳性结果而起,这太坑了!法院把责任判给了诊断试剂公司和医院,但这事的始作俑者其实是一种被称为“基质效应”的免疫检测干扰现象。
在ELISA实验中,偶尔会遇到样品浓度挨近试剂盒的灵敏度就容易发生样本OD450值低于空白值的现象,特别是在血清和血浆样本中。这就有可能是基质效应导致的结果。
一、什么是基质效应呢?
首先我们要知道什么是基质,基质是指样品中目标分析物以外的部分。由于基质成分会对分析过程有显著干扰,影响分析结果的准确性。业内把这些影响统称为基质效应。这是ELISA试剂盒开发和使用中需要避开的雷。
二、如何判断是否是基质效应呢?
当单个样本或少量样本值低于空白值时,可能是实验操作出现问题,这时应增加重复,进步操作技术。当许多样本都低于空白值时,应思考基质效应的影响,建立校正曲线予以修改。基质效应的原因错综复杂,有可能是样品中存在的基质导致原抗体的联络结合能力下降,便产生了样本值低于空白值的现象。导致样本值无法计算出数值,或许数值为负。
三、如何评估基质效应?
第一种方法是采用线性稀释,一般来讲,抗原和捕获抗体、检测抗体之间的结合作用很强,样品浓度被稀释并不影响它们的结合,而造成基质效应的非特异结合的力要弱很多,如果不断稀释样品,非特异结合造成的干扰会逐步减少,测量值也更接近真实值。没有基质效应时,无论如何稀释,测量值都和真实值吻合。而有基质效应时,稀释会造成非特异性结合比例的减少,测量值也相应地产生很大改变。
第二种方法是掺入回收率实验,将低、中和高浓度的分析物掺入到已测定过浓度的样本中,掺入前后实测到的浓度增加部分与掺入浓度之比就是回收率,回收率以百分比的形式呈现。回收率介于80-120%,才符合标准。
四、那我们如何避免ELISA实验中基质效应?
基质效应可以通过产品研发阶段的优化尽可能去消除的。菲恩生物针对ELISA产品研发进行了多种优化。ELISA试剂盒在开发进程中,标准品不选用人或动物血清、血浆作为标准曲线的稀释液,只能选用其仿照物。我们量身定制的缓冲液系统,这些优化后的缓冲液体系能很好消除基质效应。还有当检测某个分析物时,其他相关因子或类似结构因子如果有非特异性结合,也会导致基质效应,我们也因此做了大量的交叉反应,确保没有明显的交叉反应和干扰。而且我们试剂盒必须通过严格的基质效应测试,全部包括线性稀释和掺入回收率实验,并把测试结果记录在说明书中。详情请咨询菲恩生物

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