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提高单抗融合率的6大影响因素

来源:菲恩生物   发布时间:2020-07-17 13:43   点击量:

刚开始做单抗的时候难免会碰到细胞融合不成功或者是融合率比较低的情况,现在小编就总结几点影响融合率的因素,希望能够对做实验的科研工作者有点帮助。

单克隆抗体制备流程

1.融合之前一定要取小鼠血检测效价,效价高于2万才比较适合做融合,低于2W效价的融合效果可能会不太理想。

2.骨髓瘤细胞SP2/0的状态很重要,一定要保证细胞状态非常好、无污染、大面积死亡现象,融合前一定要保持细胞对数生长期。

3.融合使用的PEG、胎牛血清质量直接决定了融合率高低,对不同品牌、批号的产品进行预实验筛选,选择质量最好的PEG、胎牛血清能有效保证融合成功率。

4.融合时SP2/0与脾细胞的比例也需要注意,虽然10:1-1:10都能融合成功,但最佳的融合效率一般在2:1-1:2之间。无论何种比例,融合时一定要保证2种细胞都不含血清成分并充分混匀在一起,融合过程中要始终保持融合管旋转,滴加PEG及终止融合时都应遵循先慢后快的原则,避免对细胞冲击过大。

5.饲养层细胞这个因素也会影响融合效果,小鼠腹腔巨噬细胞、脾细胞、胸腺细胞等都可以作为杂交瘤的饲养细胞,其中以腹腔巨噬细胞为最佳。同时,每孔的饲养细胞数量也需要注意,过多会争夺培养基营养使杂交瘤细胞生长难以维继,过少会起不到饲养层的作用,所以需要保持在一个合理范围内才能起到良好的效果。

6.合理的使用一些添加剂产生事半功倍的效果,例如本公司自行研制的杂交瘤细胞培养基添加剂,可以有效延长培养基使用寿命、提高杂交瘤细胞生长速度、提高融合率,在实验条件不太理想时也能保持较高的融合效率。

当然影响融合率的还有一些其他因素,比如融后每孔细胞铺的数量多少、离心转速及时间、吹打细胞力度等都会产生一定影响,实际实验过程中就得靠我们多加注意积累经验,自然熟能生巧,水到渠成了。

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